东谈主乳铁卵白(LTF)酶联免疫(ELISA)试剂盒使用阐明书

本试剂仅供研究使用，不得用于临床会诊 规格：48T/96T

实践计划：

本试剂盒用于测定东谈主血清、血浆、组织匀浆及关联液体样本中乳铁卵白(LTF)的含量。

实践旨趣：

本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中东谈主乳铁卵白(LTF)水平。用纯化的东谈主乳铁卵白(LTF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中次序加入乳铁卵白(LTF)，再与HRP标记的乳铁卵白(LTF)抗体汇集，酿成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过透彻洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下滚动成蓝色，并在酸的作用下滚动成最终的黄色。形式的浅深和样品中的乳铁卵白(LTF)呈正关联。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过程序弧线筹算样品中东谈主乳铁卵白(LTF)浓度。

样本科罚及要求：

1.血清：室温血液当然凝固10-20分钟，离心20分钟控制（2000-3000转/分）。仔细收罗上清，保存流程中如出现千里淀，应再次离心。

2.血浆：应笔据标本的要求聘用EDTA或柠檬酸钠看成抗凝剂，夹杂10-20分钟后，离心20分钟控制（2000-3000转/分）。仔细收罗上清，保存流程中如有千里淀酿成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收罗，离心20分钟控制（2000-3000转/分）。仔细收罗上清，保存流程中如有千里淀酿成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参如实施。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收罗。离心20分钟控制（2000-3000转/分）。仔细收罗上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml控制。通过反复冻融，以使细胞龙套并放出细胞内成份。离心20分钟控制（2000-3000转/分）。仔细收罗上清。保存流程中如有千里淀酿成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取分量1g，加入9ml的PBS、PH7.4，匀浆的比例1:9，匀浆液选取PBS（PH=7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）。离心20分钟控制（3000-5000转/分），仔细收罗上清。

6.不行检测含NaN3的样品，因NaN3阻难辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注：标本溶血会影响终末检测成果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需自备的仪器耗材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

操作步调：

1、加样：程序品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50μl不同浓度的程序品，空缺孔设定1个孔加入50μl蒸馏水（空缺对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作交流）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不涉及孔壁，轻轻徘徊混匀。

2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

4、洗涤：预防揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如斯重迭5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空缺孔之外。

6、温育：操作同2。

7、洗涤：操作同4。

8、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻轰动混匀，37℃避显豁色15分钟.

9、拆开：每孔加拆开液50μl，拆开反馈（此时蓝色立转黄色）。

10、测定：以空缺孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加拆开液后15分钟以内进行。

试剂盒性能：

1. 样品线性转头与预期浓度关琢磨数R值为0.98以上。

2. 批内变异所有与批间变异所有应分手小于10%和15% 。

检测范围：

5 μg/mL – 130 μg/mL

聪惠度：

最低检测浓度小于 1 μg/mL

保存要求及灵验期：

1. 试剂盒保存：2-8℃。

2．灵验期： 6个月

防御事项：

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温均衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温均衡30分钟。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响成果。

3. 各步加样均应使用加样器，并频频校对其准确性，以幸免锤真金不怕火差错。一次加样工夫最佳扫尾在5分钟内，如标本数目多，保举使用排枪加样。封板膜只限一次性使用，以幸免交叉沾污。

4. 请每次测定的同期作念程序弧线，最佳作念复孔。如标本中待测物资含量过高（样本OD值大于程序品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，筹算时请终末乘以总稀释倍数（×n×5）。

5. 本试剂不同批号组分不得混用，底物请避光保存。

6. 严格按照阐明书的操作进行，锤真金不怕火成果判定必须以酶标仪读数为准.

7. 所有样品，洗涤液和多样毁灭物齐应按传染物科罚。

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